流式細胞儀是一種廣泛應用于生物醫學研究和臨床診斷的分析儀器,能夠高效地對單個細胞或其他微小顆粒進行快速、定量的多參數分析。它結合了流體力學、光學原理以及計算機技術,通過對細胞的大小、顆粒結構、表面標志物等特征進行分析,能夠為研究人員提供極為豐富的信息。具有高通量、高靈敏度、實時性強等優點,因此被廣泛應用于免疫學、腫瘤學、血液學、分子生物學等領域。
1.細胞懸浮液的制備:
細胞樣本通常需要在使用前進行分散成單個細胞懸液。這是因為細胞儀通過流動的液流將細胞逐一引入檢測通道。細胞懸液的質量對實驗結果的準確性至關重要。
2.流動通道與單細胞對齊:
采用了狹窄的流動通道,利用流體動力學原理確保細胞懸液中的細胞按順序逐一經過激光束。每個細胞通過激光照射時,都會產生不同的光散射和熒光信號。
3.光散射與熒光檢測:
通過激光束照射流動的細胞,并通過前向散射光(FSC)和側向散射光(SSC)來測定細胞的大小和形態。前向散射光代表細胞的大小,側向散射光反映細胞內部的結構復雜性,如顆粒數量和形態。
除了光散射信號,還可利用熒光標記物對細胞表面、細胞內或核內特定分子進行標記。當這些標記物被激光激發時,細胞會發出熒光信號,可精確檢測這些信號并分析不同的熒光顏色。通過對不同熒光信號的分析,研究人員可以同時檢測到多個細胞特征,如表面抗原的表達、細胞周期的變化、細胞內鈣離子濃度等。
4.信號處理與數據分析:
信號檢測系統能夠快速獲取每個細胞的多項數據,這些數據隨后會傳送到計算機進行處理和分析。分析軟件根據預設的參數進行數據篩選、聚類和統計分析,最終生成各種圖形和統計報告。這些數據可以幫助研究人員對細胞群體的特征進行深度分析,如不同細胞群體的分布、表型特征的差異等。
流式細胞儀的關鍵技術:
1.多參數分析:
傳統的細胞分析技術通常只能分析單一參數,如細胞大小或顆粒性。而細胞儀則能夠同時分析多個參數,能夠提供更為全面的細胞信息。例如,研究人員可以通過多重熒光標記分析細胞表面不同抗原的表達,從而獲取細胞的多個表型特征。
2.高通量檢測:
檢測速度極快,通常每秒鐘可對數千個細胞進行分析。這使得細胞儀能夠進行大規模的細胞分析,并且在短時間內獲得大量數據,特別適用于需要高通量分析的研究領域,如癌癥免疫治療、干細胞研究等。
3.細胞排序:
一些具備細胞分選功能。細胞分選技術能夠根據細胞的熒光標記或其他特征,將細胞分離成不同的群體并收集起來。這項技術被廣泛應用于純化特定細胞亞群、分離干細胞、免疫細胞等。